E. coli O157:H7 يكي از عوامل اصلي ايجاد كننده مسموميت‌هاي غذايي در انسان مي¬باشد. با توجه به خطر بالاي آلودگي به اين پاتوژن و دوز عفوني بسيار پايين آن، بكارگيري يك روش تشخيصي سريع، اختصاصي و با حساسيت بالا لازمه كنترل اين پاتوژن و پيشگيري از عفونت¬هاي ناشي از آن مي¬باشد. با توجه به زمان¬بر بودن روش¬هاي مرسوم و خصوصا عدم اختصاصيت كافي و گران قيمت بودن روش¬هاي مولكولي موجود، بر آن شديم براي اولين بار در ايران كيتي تشخيصي با اختصاصيت و حساسيت بالا براي شناسايي اين سروتايپ بيماري¬زا طراحي نماييم. بدين منظور ابتدا با استفاده از روش¬هاي بيوانفورماتيكي يك ماركر ژنتيكي مناسب را براي اين سروتايپ انتخاب نموده و سپس با استفاده از روش LAMP اين ماركر ژني را هدف قرار داده و كيتي تشخيصي بر اين اساس طراحي نموديم. بكارگيري روش ارزان قيمت LAMP در طراحي اين كيت و استفاده از يك ماركر ژني بسيار اختصاصي در آن، باعث مي¬شود كه اين كيت به عنوان يك ابزار قدرتمند، دقيق و ارزان جهت شناسايي اين سروتايپ بيماري¬زا در آزمايشگاه¬هاي كنترل كيفي مواد غذايي و آزمايشگاه¬هاي تشخيصي با تجهيزات اندك باشد.

استراتژي هاي كلونينگ رايجي كه چندين دهه در حال استفاده هستند شامل استفاده از آنزيم هاي برشگر نوع II براي توليد قطعات DNA مناسب، تغييرات انتهاهاي DNA به منظور ايجاد انتهاهاي صاف و يا چسبنده و ligate كردن قطعات DNA براي توليد پلاسميد يا ساير انواع وكتورهاي بياني نوتركيب مي باشد. اما اين روش¬ ها معايب بسياري دارد. اين روش ها وابسته به هضم آنزيمي توالي اينسرت و وكتور بياني مورد نظر با استفاده از دو آنزيم برشگر متفاوت مي باشد. بنابراين، در صورتي كه جايگاه برش آنزيمي آنزيم برشگر در توالي اينسرت وجود داشته باشد با محدوديت مواجه خواهيم شد. ثانيا، كارايي پايين هضم آنزيمي انتهاهاي محصولات PCR بوسيله آنزيم هاي برشگر اغلب منجر به ناكامي در روش هاي ساخت پلاسميد مي شود. تمامي اين مشكلات نتيجه نيازمندي به هضم آنزيمي براي توليد انتهاهاي چسبنده در توالي اينسرت و همچنين وكتور بياني مورد نظر مي باشد. علاوه براين، تمامي آنزيم هاي برشگر مورد استفاده جهت انجام فرايند كلونينگ در كشور ما وارداتي بوده و به وسيله ي شركت هاي بزرگ اروپايي و آمريكايي ساخته و عرضه مي شوند كه اين امر منجر به خروج ميزان زيادي ارز از كشور مي شود. با توجه به محدوديت هاي ذكر شده، در اختراع حاضر ما بر آن شديم تا نسل جديدي از كلونينگ پيشساز ميكروآرنا بدون نياز به استفاده از آنزيم هاي برشگر را ارائه نماييم و در نهايت يك كيت بومي كلونينگ پيشساز ميكروآرنا را به محققين كشورمان عرضه نماييم. در استراتژي ارائه شده در واقع با مهندسي توالي هاي موجود در يك وكتور بياني و طراحي دو مجموعه پرايمر هوشمند براي واكنش هاي PCR مربوط به توليد توالي پيشساز Pre-microRNA مورد نظر ما توانستيم توالي اينسرت (pre-microRNA) با جايگاه هاي برش متناسب با وكتور بياني را بدون نياز به آنزيم برشگر توليد نماييم. با استفاده از اين روش محققين مي توانند هر نوع توالي پيشساز مربوط به هر ميكروآرنايي را بدون نياز به استفاده از آنزيم هاي برشگر در داخل وكتور بياني موجود در كيت كلون نمايند. اختراع حاضر با ارائه پروتكل باكارايي بالا يك روش سريع،راحت ، بسيار ارزان و مطمئن در زمينه ي كلونينگ پيشساز ميكروآرنا مي باشد.